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名称：

pEBFP-N1质粒

目录号 IPD8057

质粒类型：荧光蛋白报告载体

启动子：CMV

克隆方法：多克隆位点，限制性内切酶

载体大小：4.7kb

启动子：CMV

5' 测序引物及序列：5'd[CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG]3'

载体抗性：Kanamycin (卡那霉素)

筛选标记：新霉素（Neomycin）

质粒操作：

收到质粒干粉后请先5000rpm离心1分钟，再加入20μl ddH2O溶解质粒。

取1支100μl感受态于冰上解冻10分钟，加入2μl质粒，再冰浴30分钟后，42℃热激60秒，不要搅动，再冰浴2分钟。

加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45分钟（30℃培养1-1.5小时）。

6000rpm离心5分钟，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上。

将平板倒置37℃培养14小时，如果要求是30℃则培养20小时。

挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14小时，根据实验需要提取质粒。

发布于：湖北省